miRNA检测服务|qPCR是miRNA检测和验证的金标准

加尾法通过poly(A)聚合酶在miRNA末端添加poly(A)尾，再用5’端带通用序列的Oligo dT进行反转录，得到长度足够的cDNA模板，最后通过miRNA特异性的正向引物与通用反向引物进行qPCR检测。

 图1.加尾法qPCR示意图

茎环法通过设计合成miRNA特异性的反转录引物对目的miRNA进行选择性反转录， 得到长度足够的cDNA模板。此反转录引物3’端为与目的miRNA 的末端6-8个碱基配对 的特异性碱基，5’端为通用序列茎环结构 。qPCR检测通过通过miRNA特异性的正向引物与茎环部位的通用反向引物来进行扩增实现的。

 图2.茎环法qPCR示意图

提示：在miRNA检测中，加尾法与茎环法各有优劣，请根据具体课题的情况和需求进行选择。  

擎科生物致力于qPCR检测多年，在miRNA的加尾法与茎环法检测方面都有丰富的经验：

• 我们使用只针对单链RNA的加poly(A)试剂盒，有效消除miRNA前体对miRNA检测的影响；

• 在茎环法的检测上，通过优化反转录步骤能有效提高检测的灵敏度；

• 在血清和血浆循环miRNA的回收纯化上有相应的方法使回收率得到提高，从而提升了检测效果和灵敏度。