AAV实现特异性表达调控小妙招，拿来吧你！

在国际上，病毒委员会根据病毒衣壳的不同，找到了十多种不同的血清型，超过100种病毒变异体。不同的AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构，因此可识别不同的细胞表面受体，不同血清型AAV转染的组织亲嗜性，感染效率，表达时间也不尽相同，比如K-MR Prasad等人验证不同血清型心肌细胞特异性基因传递中的效率（图1），因此实现基因的特异性表达可以选择针对不同组织和部位的AAV血清型，除此之外，目的血清型 AAV 载体也可以包装成单链或自身互补的双链两种形式，自身互补双链在表达时间和表达强度上均优于单链 AAV，并且可以显著降低机体的免疫反应。

图1.五种AAV血清型在心肌细胞特异性基因表达效率

擎科可提供数十种针对不同组织和细胞的特异性血清型，以及单双链AAV载体,具体如下：

表1.组织特异性血清型列表

AAV作为新一代基因治疗载体前景广阔，其中很重要的原因在于其特异性强。得益于AAV的不同血清型，配合以合适的注射方法，达到组织特异性基因调控，那么不同的AAV的注射方式，对AAV的注射体积滴度是多少呢？

AAV的体内注射（给药）方式分为系统性给药和局部给药，系统性给药主要有尾静脉、颈静脉、眼眶静脉和腹腔静脉给药；局部给药方式常见的包括脑立体定位、肌肉定点注射、心肌原位注射、玻璃体腔内注射、关节腔注射等；通常采用局部原位注射的方式，使得病毒只在局部范围内扩散，从而实现组织特异性的感染。例如Tanya Tolmachova等人采用视网膜下注射AAV2/2-CBA-GFP，证实了该表达系统高效转导光感受器的能力（图2）。系统性给药是特点是病毒注射的体积较大，一般需要100-1000μL不等，病毒在体内扩散的范围广，一般系统性给药的方式操作较为简单，给药比较方便；

图2.视网膜下注射给药途径图解

局部给药则病毒注射量要求较少，一般100 μL以内，但对滴度要求较高；由于是直接将AAV递送到目标组织，局部给药会有更好的靶向性，如果是临床基因治疗，局部给药注射的病毒量少，病理毒性会更小。具体推荐如下表，但是注射部位如何选择，应该注射多少病毒，注射后多久去检测等问题，具体的科研实验还需要具体情况分析。
 

表2.注射方式推荐注射体积及滴度列表

AAV血清型主要利用侵染特异性，而组织特异性启动子可调控外源基因在特定来源的细胞或组织部位中表达，一般由特定细胞专一表达的基因启动子鉴定得来的，某种特异性启动子AAV2，可侵染多种组织，但仅在某特定细胞表达。如Alastair J. MacDonald等人利用hGFAP启动子启动hM3Dq_mCherry或mCherry腺相关病毒注射到DVC星形胶质细胞观察细胞对急性营养过剩有反应（图3）。
 

图3.hM3Dq_mCherry在星型胶质细胞中的表达

目前已报道的组织特异性启动子种类繁多，擎科可提供数十种针对不同组织、细胞的特异性启动子，具体如下：
 

表3.组织特异性启动子列表

在实现组织特异性表达调控的应用中，为达到较好的特异性以及较高的表达效率，可以根据以上推荐组合使用，比如通过特异性血清型+特异性启动子组合+原位注射的方式实现细胞特异性表达。